Zadušnice su posvećene mrtvima i običaj je toga dana otići na službu u crkvu, obići grobove, preliti ih vinom, urediti i okititi cvećem i upaliti sveće.

Uobičajeno je da se na zadušnice služi liturgija, na kojoj sveštenik preliva vinom donešeno žito -koljivo, a posle službe se odlazi na groblja, gde se pale sveće, dok sveštenici obilaze i kade grobove.

Oni koji nisu u mogućnosti da odu na groblje, trebalo bi da odu do najbližeg hrama i da tu obave pomen za svoje upokojene.

Ovoga dana se posebno obraća pažnja na deljenje milostinje, obavezno se svakom prosjaku, udeli milostinja i deo hrane spremljene za taj dan.

Velike zadušnice vezane su za početak Vaskršnjeg posta, pa su pokretne, odnosno nemaju određeni datum. Nedelja u kojoj se održavaju ove zadušnice, naziva se još i Zadušna nedelja. To je treća nedelja pred Vaskršnji post.

Srpska pravoslavna crkva u toku godine obeležava Miholjske zadušnice, zatim letnje Duhovske, nakon toga prolećne, uoči Velikog posta i Mitrovske. Sve se obeležavaju u subotu, jer je Isus taj dan uoči vaskrsenja proveo upokojen.